ازمايشگاهي…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 25
3-2 اناليز بيوانفورماتيکي ناحيه ALCAM.. ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………. 31
3-2-1 استخراج توالي مورد نظر………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 31
3-2-2 بهينه سازي توالي يا Optimization…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 32
3-3 سنتز شيميايي DNA ALCAM………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………. 32
3-3-1 سنتز شيميايي ژن نوترکيب………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 32
3-3-2 پايداري و شرايط نگهداري DNA سنتز شده……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 32
3-3-3 محلول سازي DNA ليوفيليزه…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 33
3-4 کلونينگ پلاسميد- AMP+ pBSK حاوي DNA پروتئين ALCAM ………………………………………………………………………. 33
3-4-1 اماده سازي باکتري شايسته…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 33
3-4-1-1 مواد و محلول ها………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 33
3-4-1-2 روش کار…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 34
3-4-2 ترانسفورماسيون پلاسميد به سلول هاي مستعد TOP10 E.coli…………………………………………………………………………………………………………….. 35
3-4-2-1 روش کار………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………. 35
3-4-3 ارزيابي کلوني ها………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 36
3-4-4 استخراج پلاسميد – AMP+ pBSK حاوي DNAپروتئين ALCAM…………………………………………………………… 36
3-4-5 تاييد آنزيمي پلاسميد استخراج شده……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 38
3-4-5-1 هضم آنزيمي دوگانه يا Double digestion…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………. 39
3-4-5-2 الکتروفورز……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 39
3-5 ساب کلونينگ ژن پروتئين ALCAM…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 39
3-5-1 تخليص DNA ناحيه CD166از ژل…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………. 39
3-5-2 لايگيشن…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………. 43
3-5-3 ترانسفورماسيون……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………. 43
3-5-3-1 اماده سازي سلول هاي شايسته……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 44
3-5-3-2 ترانسفورماسيون سلول هاي شايسته E.coli BL21(DE3) با محصول لايگيشن…………………………………………. 45
3-5-4 ارزيابي کلوني ها…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………. 45
3-5-5 استخراج پلاسميد بياني pet-28aحاوي ژنپروتئين ALCAM……………………………………………………………. 46
3-5-6 تاييد انزيمي پلاسميد استخراج شده………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………. 48
3-6 بيان پروتئين پروتئين ALCAM……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 48
3-6-1 القاء بيان پروتئين به کمک IPTG…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 49
3-6-2 بررسي بيان به کمک تکنيک SDS-page………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………. 49
3-6-2-1 محتويات كيت. SDS-page ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 50
3-6-2-2روش انجام SDS_page………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 51
فصل چهارم: نتايج
4-1نتايج حاصل از اناليز بيوانفورماتيکي پروتئين پروتئي

دسته‌ها: No category

دیدگاهتان را بنویسید